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中华老年骨科与康复电子杂志

中华老年骨科与康复电子杂志 ›› 2018, Vol. 04 ›› Issue (01) : 4 -8. doi: 10.3877/cma.j.issn.2096-0263.2018.01.002

所属专题： 文献；

骨质疏松

唑来膦酸抑制RAW264.7细胞系分化的最佳浓度体外实验
张禄锴1, 马剑雄2, 赵杰2, 匡明杰2, 卢斌2, 王颖2, 孙磊2, 马信龙3,†()   
  1. 1. 300211　天津市天津医院骨科研究所；300193　天津中医药大学研究生院
    2. 300211　天津市天津医院骨科研究所
    3. 300211　天津市天津医院骨科研究所；300142　天津市天津医院
  • 收稿日期:2017-04-01 出版日期:2018-02-05
  • 通信作者: 马信龙
  • 基金资助:
    国家自然科学基金项目(81572154); 吴阶平医学基金会临床科研专项资助项目(320.6750.15185); 天津市卫生局科技攻关项目(15KG123)

Effects and optimum concentration of zoledronate on RAW264.7

Lukai Zhang1, Jianxiong Ma2, Jie Zhao2, Mingjie Kuang2, Bin Lu2, Ying Wang2, Lei Sun2, Xinlong Ma3,†()   

  1. 1. Orthopedics institute of Tianjin Hospital, Tianjin 300211, China; Graduate school of Tianjin University of Traditional Chinese Medicine, Tianjin 300193, China
    2. Orthopedics institute of Tianjin Hospital, Tianjin 300211, China
    3. Orthopedics institute of Tianjin Hospital, Tianjin 300211, China; Tianjin Hospital, Tianjin 300142, China
  • Received:2017-04-01 Published:2018-02-05
  • Corresponding author: Xinlong Ma
  • About author:
    Corresponding author: Ma Xinlong, Email:
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引用本文：

张禄锴, 马剑雄, 赵杰, 匡明杰, 卢斌, 王颖, 孙磊, 马信龙. 唑来膦酸抑制RAW264.7细胞系分化的最佳浓度体外实验[J]. 中华老年骨科与康复电子杂志, 2018, 04(01): 4-8.

Lukai Zhang, Jianxiong Ma, Jie Zhao, Mingjie Kuang, Bin Lu, Ying Wang, Lei Sun, Xinlong Ma. Effects and optimum concentration of zoledronate on RAW264.7[J]. Chinese Journal of Geriatric Orthopaedics and Rehabilitation(Electronic Edition), 2018, 04(01): 4-8.

目的

观察唑来膦酸盐对RAW264.7细胞系毒性作用的浓度范围和抑制RAW264.7分化为破骨细胞的最佳实验浓度。

方法

以小鼠前破骨细胞系RAW264.7为研究对象，应用MTT法检测唑来膦酸盐对小鼠前破骨细胞系RAW264.7的毒性作用范围。使用TARP染色法观察不同浓度的唑来膦酸盐作用下破骨细胞的生成数目。

结果

体外培养24 h后，酶联免疫反应吸光度结果显示，10-3 mol/L（0.511±0.920），10-4 mol/L（0.615±0.577）唑来膦酸对小鼠前破骨细胞系RAW264.7增殖有毒性作用，与空白对照组（0.789±0.061）相比，差异有统计学意义（F=5.880，P<0.01）。TRAP染色破骨细胞计数结果显示：10-5 mol/L（8.333±0.817）、10-6 mol/L（10.400±1.817）、10-7 mol/L（11.250±2.750）及10-8 mol/L（11.143±1.864）唑来膦酸盐实验组破骨细胞数与空白对照组破骨细胞数（13.833±2.483）相比，差异具有统计学意义（F=27.972，P<0.05），且呈浓度依赖性，当唑来膦酸盐浓度为10-5 mol/L时，抑制效果最明显（P<0.01）。

结论

唑来膦酸盐抑制RAW264.7细胞系分化为破骨细胞的最佳体外实验浓度为10-5 mol/L。

关键词: 唑来膦酸, 破骨细胞, 细胞分化, 细胞毒性, RAW264.7
Objective

To further observe the concentration range of zoledronate on RAW264.7 cell toxic effect and confirm the optimum concentration in inhibition of RAW264.7 differentiation of osteoclast.

Methods

Mouse leukemia macro phage RAW264.7 was cultured as research object. RAW264.7 osteoclast toxic effect of zoledronate was detected by MTT method. Inhibition of osteoclast differentiation by different concentration of zoledronate were detected by tartrate-resistant acid phosphatase staining method.

Results

After 24 h vitro culture, Enzyme-linked immunosorbent assay absorbance indicated that 10-3 mol/L (0.511±0.920), 10-4 mol/L (0.615±0.577) concentrations of zoledronate had significantly toxic effects on cells compared with the blank control group (0.789±0.061)(F=5.880, P<0.01). TRAP staining osteoclast count indicated that 10-5 mol/L (8.333±0.817), 10-6 mol/L (10.400±1.817), 10-7 mol/L (11.250±2.750) and 10-8 mol/L (11.143±1.864) concentrations of zoledronate all significantly inhibited RAW264.7 differentiation compared with the blank control group (F=27.972, P<0.05), showing concentration dependence, 10-5 mol/L zoledronate had the highest inhabitation effect (P<0.01).

Conclusion

Zoledronate can effectively inhibit RAW264.7 differentiation, and the optimum concentration in vitro is 10-5 mol/L.

Key words: Zoledronic acid, Osteoclast, Cell differentiation, Cytotoxicity, RAW264.7
表1 唑来膦酸干扰前破骨细胞活性及抑制前破骨细胞分化实验所用试剂和仪器
试剂及仪器 来源
DMEM培养基、胰蛋白酶、胎牛血清、 Sigma公司，美国
磷酸缓冲液D-Hank’s 自制
二甲基亚砜 美国sigma公司
青链霉素溶液 美国Invitrogen公司
MTT试剂 美国sigma公司
碱性磷酸酶试剂盒 南京建成生物工程研究所
细胞培养皿 美国Corning公司
倒置显微镜 德国Leica公司
细胞培养箱 德国Heraeus公司
唑来膦酸 美国sigma公司
图1 不同浓度唑来膦酸盐作用36 h后各孔的吸光度值
图2 不同浓度唑来膦酸盐组破骨细胞生成数目
图3~7 不同浓度唑来膦酸盐作用下各组TRAP染色结果。图3、4、5、6、7唑来磷酸盐浓度分别为10-8 mol/L、10-7 mol/L、10-6 mol/L、10-5 mol/L
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